Հայաստանի ատենախոսությունների բաց մատչելիության պահոց = Open Access Repository of the Armenian Electronic Theses and Dissertations (Armenian ETD-OA) = Репозиторий диссертаций Армении открытого доступа

Արտաոսկրածուծային էրիթրոպոեզի ախտաբանական գործընթացների հետազոտությունը խոզերի աֆրիկյան ժանտախտի դեպքում

Միսակյան, Ալլա Էդիկի (2016) Արտաոսկրածուծային էրիթրոպոեզի ախտաբանական գործընթացների հետազոտությունը խոզերի աֆրիկյան ժանտախտի դեպքում. PhD thesis, ՀՀ ԳԱԱ Մոլեկուլային կենսաբանության ինստիտուտ.

[img] PDF (Thesis)
Available under License Creative Commons Attribution.

Download (4Mb)
    [img] PDF (Abstract)
    Available under License Creative Commons Attribution.

    Download (925Kb)

      Abstract

      Խոզերի աֆրիկյան ժանտախտը (ԽԱԺ) խոզերին բնորոշ վիրուսային հիվանդություն է, որի բուժման և կանխարգելման բացակայությունը բերում է կենդանիների զանգվածային մահվան, ինչը լուրջ սոցիալ-տնտեսական խնդիր է ամբողջ աշխարհում: Թեև հիվանդությունը հայտնի է դեռևս 20-րդ դարի սկզբից, սակայն նրա ախտաբանությանը վերաբերվող մի շարք հարցեր, ինչպես օրինակ արյունաստեղծման, մասնավորապես, էրիթրոպոեզի ախտաբանական տեղաշարժերը և նրանց զարգացման մոլեկուլային մեխանիզմները դեռևս ուսումնասիրված չեն: Հայտնի է, որ որոշ ախտաբանական վիճակներում, մասնավորապես սուր սակավարյունությունների դեպքում խթանվում է արտաոսկրածուծային, այսպես կոչված, «սթրես» էրիթրոպոեզը, որի գլխավոր օրգանն է փայծաղը: ԽԱԺ-ի դեպքում,որինբնորոշենարյունազեղումները,արյունահոսությունները, սակավարյունությունը, վիրուսի ազդեցությամբ փայծաղի ախտակառուցվածաբանությունը բավականաչափ ուսումնասիրված է, մինչդեռ նրանում արտաոսկրածուծային էրիթրոպոեզի ախտաբանությունը գործնականում գրեթե հետազոտված չէ: Հետաքրքրություն է ներկայացնում նաև ԽԱԺ-ի վիրուսի անմիջական ազդեցությունը ոսկրածուծի էրիթրոիդ բջիջների վրա ex vivo պայմաններում՝ առանց օրգանիզմի իմունային համակարգի միջնորդավորված ազդեցության: Աշխատանքի նպատակը և խնդիրները: Աշխատանքի նպատակն է ուսումնասիրել էրիթրոպոեզի ախտաբանական գործընթացները խոզերի աֆրիկյան ժանտախտի սուր ձևի դեպքում` կատարելով փայծաղի, ոսկրածուծի (in vivo) և ոսկրածուծի առաջնային կուլտուրայի (in vitro) էրիթրոիդ բջիջների համեմեատական վերլուծություն, ինչպես նաև բացահայտել փոխհատուցող մեխանիզմների դերը կենդանիների կենսունակության և հիվանդության ախտանշանների զարգացման ընթացքում: Այս նպատակի իրականացման համար դրվել էին հետևյալ խնդիրները Հիվանդության սուր ձևի կլինիկական արտահայտում՝ խոզերի աֆրիկյան ժանտախտի վիրուսի (գենոտիպ II) միջմկանային ներարկման ճանապարհով: Փայծաղում «սթրես» էրիթրոպոեզի ընթացքում առաջացող էրիթրոիդ բջիջների ձևաբանական ուսումնասիրություն և նրանց համեմատում ոսկրածուծային էրիթրոիդ բջիջների հետ ԽԱԺ-ի սուր ձևի դինամիկայում: Ոսկրածուծի առաջնային կուլտուրայի էրիթրոիդ բջիջների ձևաբանական ուսումնասիրություն ինտակտ և ԽԱԺ-ի վիրուսով վարակման պայմաններում: Փայծաղի, ոսկրածուծի առաջնային կուլտուրայի էրիթրոբլաստների բջջասպեկտրոֆոտոմետրիկ և բջջաքիմիական հետազոտություն ԽԱԺ-ի վիրուսով փորձարարական վարակման պայմաններում: Խոզերի արյան և հյուսվածքների կենսաքիմիական հետազոտություն ԽԱԺ-ի ընթացքում երկաթի փոխանակության ուսումնասիրության նպատակով: Популяционный анализ основных клеток паренхимы селезенки свиней показал, что в контроле эритроидные клетки составляют около 6.0% от популяции ядерных клеток селезенки, но в динамике африканской чумы свиней (АЧС) их количество меняется: начиная с 4 дня после инфицирования (дпи) число эритроидных клеток постепенно увеличивается, составляя к терминальной стадии болезни около 22% всех ядерных форм селезенки. В 3-4 дпи в селезенке появляются в небольшом количестве проэритробласты и патологические формы эритроидных клеток, которые отсутствуют в селезенке здоровых свиней. Таким образом, при африканской чуме в селезенке значительно стимулируется внекостномозговой эритропоэз. Несмотря на то, что при острой форме АЧС, резко ускоряется дифференцировка резидентных эритроидных клеток селезенки, размерные показатели и содержание РНК в них лишь недостоверно отличаются от аналогичных клеток стационарного эритропоэза КМ. Анализ содержания ДНК в эритроидных клетках селезенки и первичной культуры костного мозга при острой форме АЧС выявил сдвиг гистограмм распределения ядер ранних эритроидных клеток по классам плоидности вправо. Этот процесс начинается на раннем этапе АЧС и заканчивается к 4м суткам инфицирования. Исследование эритробластических островков костного мозга свиньи в норме и в динамике острой формы АЧС показало, что начиная с 2-ого дпи их количество достоверно (p<0.05-0.01) уменьшается, что может быть обусловлено прямым и/или опосредованным воздействием вируса. В данной работе нами впервые проводилось исследование эритроидных клеток в условиях in vitro, в первичной нестимулированной культуре костного мозга (ПККМ) в течение четырехдневного культивировании в контроле и под действием вируса АЧС (генотипа II). Исследование эритроидной популяции выявило, что несмотря на репликацию вируса АЧС в ПККМ свиньи, популяционные показатели клеток эритроидного ряда не отличаются от контрольных, однако из-за сокращения численности лимфоидных клеток их относительное содержание возрастает. Содержание ДНК и РНК в эритроидных клетках ПККМ как в интактных так и в инфицированных вирусом не демонстрируют существенной разницы. Все это говорит об отсутствии прямого воздействия вируса АЧС на эритроидные клетки. Следовательно, можно полагать, что гемолиз при острой форме АЧС является следствием воздействия иммунных механизмов, и в частности медиаторов (цитокинов), выделяющихся при виремии. В данном аспекте нами показана, обратная корреляция уровней всех цитокинов (ИЛ-1β, ИЛ-6, ИЛ-8, ФНО-α) и накопления железа в ткани печени с показателями гематокрита, которые могут трактоваться в пользу гемолитического характера патологии крови. Cells population analysis of the pigs spleen parenchyma showed that erythroid cells constitute about 6.0% in all the population of spleen nucleated cells in control, but the dynamics of African swine fever (ASF) it number is changing from the 4th day post infection (dpi). the erythroid cells number gradually increases amounting about 22% to end-stage disease in all forms of spleen nuclear cells. At 3-4 dpi the proeritroblasts and pathological forms of erythroid cellsappear in a small amount, which are absent in the healthy pigs spleen. Thus, extramedullaryerythropoiesis is significantly stimulated in spleen during African swine fever. Despite the fact that in acute form of ASF dramatically accelerates spleen resident erythroid cells differentiation, dimensional indicators and RNA content in which only insignificantly different from bone marrow cells formed during stationary erythropoiesis. Analysis of the DNA content of spleen and primary culture of bone marrow erythroid cells during acute form of ASF has revealed a shift of early erythroid cells nuclei ploidy classes distribution histogram to right. This process begins early and ends to the 4th day of ASF infection. Research porcine’s bone marrow erythroblastic islands in control and dynamics of the \\acute form of ASF found that starting from the 2nd dpi their number was significantly (p<0.05-0.01) decreased, which may be due to the direct and/or indirect exposure with virus. In this work, we first carried out a study of erythroid cells in vitro conditions, that is unstimulated primary culture of bone marrow (PCBM) during four days in control and influence by ASF virus (genotype II). Erythroid population analysis found, that in spite ASF virus replication in pigs PCBM, erythroid cells population figures do not differ from the control, but because the lymphoid cells downsizing their relative abundance increased. The content of DNA and RNA in PCBM erythroid cells show no significant differences in both intact and in infected. All this indicate a lack of direct influence of erythroid cells with ASF virus. Therefore, we can assume that hemolysis in the acute form of ASF is a consequence of exposure immune mechanisms, particularly mediators (cytokines) released during viremia. In this aspect, we have shown an inverse correlation between the levels of cytokines (IL-1β, IL-6, IL-8, TNF-α) and the accumulation of iron in the liver tissue with the hematocrit which may be decided in favor of hemolytic character of blood pathology.

      Item Type: Thesis (PhD)
      Additional Information: Исследование патологических процессов внекостномозгового эритропоэза при африканской чумы свиней. A study of pathological processes of extramedullary erythropoiesis during african swine fever.
      Uncontrolled Keywords: Мисакян Алла Эдиковна, Misakyan Alla Edik
      Subjects: Biology
      Divisions: UNSPECIFIED
      Depositing User: NLA Circ. Dpt.
      Date Deposited: 31 Aug 2016 12:18
      Last Modified: 31 Aug 2016 12:20
      URI: http://etd.asj-oa.am/id/eprint/3326

      Actions (login required)

      View Item