Հայաստանի ատենախոսությունների բաց մատչելիության պահոց = Open Access Repository of the Armenian Electronic Theses and Dissertations (Armenian ETD-OA) = Репозиторий диссертаций Армении открытого доступа

Ալցհեյմերի հիվանդության դեմ ԴՆԹ-պատվաստանյութերի ստեղծումը և իմունաբանական արդյունավետության փորձարկումը կենդանիների մոդելների վրա

Հովակիմյան, Արմինե Աշոտի (2015) Ալցհեյմերի հիվանդության դեմ ԴՆԹ-պատվաստանյութերի ստեղծումը և իմունաբանական արդյունավետության փորձարկումը կենդանիների մոդելների վրա. PhD thesis, ՀՀ ԳԱԱ «Հայկենսատեխնոլոգիա» ԳԱԿ ՊՈԱԿ.

[img] PDF (Thesis)
Available under License Creative Commons Attribution.

Download (2201Kb)
    [img] PDF (Abstract)
    Available under License Creative Commons Attribution.

    Download (1091Kb)

      Abstract

      Болезнь Альцгеймера (БА) характеризуется клинически прогрессирующими когнитивными нарушениями, в конечном итоге приводящими к смерти, как правило, в течение 10 лет после установления диагноза. По подсчётам ВОЗ около 47,5 млн. человек в мире живут с деменцией. Ежегодно возникает 7,7 миллиона новых случаев заболевания. Доля общего населения в возрасте 60 лет и старше с деменцией на какой-либо момент времени составляет от 5 до 8 человек на каждые 100 человек. По прогнозам, общее число людей с деменцией составит 75,6 миллиона человек в 2030 году и почти утроится к 2050 году и составит 135,5 миллиона. БА является наиболее частой причиной слабоумия – на нее приходится 60-70% всех случаев деменции. Проблема БА существует во всех странах мира, в том числе и в Армении. Статистические данные остаются наиболее изученными в США, где по состоянию на 2013 год 5,2 миллиона американцев различных возрастов имели данную болезнь [Alzheimer’s Association, 2013]. Из них 5 миллионов человек 65-летнего возраста и старше и около 200000 человек моложе 65 лет с ранней формой заболевания. БА занимает 6-е место по смертности в США в целом, а в группе людей 65 лет и старше занимает 5-е место. Это единственная болезнь среди самых известных 10 в Америке, которую до сих пор не удается предотвратить, вылечить и даже замедлить её прогрессирование. Смертность от БА в США увеличилась на 71% в период между 2000 и 2015 гг., в то время как смертность от других ведущих заболеваний снизилась [National Center for Health Statistics, 2015]. Все вышеперечисленные факты говорят о крайней актуальности ведения работ по изучению БА. БА является нейродегенеративным заболеванием, причина которого заключается в отложении аномальных бета-амилоидов (Аβ42) с последующим образованием амилоидных бляшек [Hardy J et al., 1991]. Поэтому терапевтические мероприятия направлены на подавление накопления аномальных Аβ. Одним из наиболее перспективных стратегий снижения уровня токсичных форм Аβ в мозге является иммунотерапия посредством специфических антител. Первое клиническое испытание вакцины AN1792, которое было начато, основываясь на том факте, что вакцина, содержащая фибриллярную Аβ42, предотвращает отложение Аβ в трансгенной мышиной модели [Schenk D et al., 1999], было остановлено преждевременно, так как y 6% пациентов из-за активации аутореактивных Т-клеток специфических к Аβ42 пептиду развился менингоэнцефалит [Orgogozo J et al., 2003]. Однако, важно отметить, что в этом исследовании у пациентов с высокими титрами анти-Аβ антител Аβ-нагрузка снизилась. Ալցհեյմերի հիվանդությունը (ԱՀ) բնութագրվում է կլինիկորեն արագ զարգացող կոգնիտիվ խանգարումներով, որոնք, որպես կանոն, ախտորոշման հաստատվելուց հետո 10 տարվա ընթացքում արդյունքում բերում են մահվան: ԱՀ նեյրոդեգեներատիվ հիվանդություն է, որի պատճառն է հանդիսանում անոմալ բետա-ամիլոիդների (Aβ42) կուտակումները սենիլային բշտիկների տեսքով և հետագա նյարդային բջիջների կորուստով, գլխուղեղի վնասված հատվածներում: Հետևաբար, թերապևտիկ միջոցառումները ուղղված են անոմալ Aβ42 կուտակումների ճնշմանը: Գլխուղեղում Aβ42-ի թունավոր ձևերի մակարդակի նվազեցման առավել հեռանկարային տարբերակներից մեկն է իմունոթերապիան, սպեցիֆիկ հակամարմինների միջոցով: Տվյալ աշխատանքում ներկայացված է Ալցhեյմերի հիվանդության (ԱՀ) բուժմանն ուղղված էպիտոպների վրա հիմնված ԴՆԹ-ի պատվաստանյութերի ստեղծումը: Վերջիններս բաղկացած են մի քանի սեփական B-բջջային էպիտոպների կրկնօրինակներից և ավանդական պատվաստանյութերի կամ տարբեր պաթոգենների օտարածին Th-բջջային էպիտոպներից, որոնց մարդիկ առնչվում են կյանքի ընթացքում, ինչպես օրինակ վիրուսային գրիպի էպիտոպները: Շնորհիվ գոյություն ունեցող հիշողության T-բջիջների ակտիվացման՝ այսպիսի օտարածին Th-էպիտոպներով պատվաստանյութերով իմունիզացիան ԱՀ վաղ և միջին տարիքի հիվանդներին կլինի անվտանգ և արդյունավետ՝: Այս գաղափարի հիման ԱՀ բուժման նպատակով ստեղծվել են AV-1955 և AV-1959 ԴՆԹ պատվաստանյութեր, որոնք փորձարկվել են մկների, ճագարների և մակակա-ռեզուսների վրա: Ինչպես հայտնի է ԴՆԹ պատրաստանյութը օժտված է հարաբերականորեն ցածր իմունոգենությամբ: Այս հետազոտություններում կիրառված ԴՆԹ պատվաստանյութի իմունոգենությունը բարձրացնելու նպատակով ներառվել է 3 օրինակ սեփական B-բջջային էպիտոպներ Aβ42 (Aβ1-11) պեպտիդի և 9/12 օտարածին Th-էպիտոպներ‒ MultiTEP: Լրացուցիչ կերպով, ԴՆԹ-ի տռանսֆեկցիայի արդյունավետության բարձրացման համար, իմունիզացիան իրականացվել է TriGrid էլոկտրոպորացիոն համակարգով: Ցուց է տրված, որ այս համակարգով իմունիզացիայի դեպքում գենի էքսպրեսիան ի համեմատ ԴՆԹ պլազմիդի ասեղնային ներարկման 100-ից ‒ 1000 անգամ հավաստիորեն բարձրանում է: Alzheimer’s disease (AD) is characterized clinically by progressive cognitive decline, eventually resulting in death, usually within 10 years of diagnosis. AD is a neurodegenerative disease, the cause of which is the abnormal deposition of aggregated forms of amyloid-beta (Aβ42) peptide as insoluble fibrils, soluble oligomers/protofibrils, senile plaques and neuronal loss in affected brain regions. Therefore, therapeutic measures aimed at suppressing the abnormal accumulation of Aβ peptide. Based on the intriguing finding, that a vaccine containing fibrillary Aβ42, prevented the deposition of Aβ and reduce behavioral deficits in a number of animal studies, now one of the most promising strategies for reducing the level of toxic forms of A in the brain is immunotherapy with specific antibodies via active immunization, which is a promising treatment for patients at early stages of AD to prevent, slow down or stop the development and progression of disease. This thesis presents the idea of designing epitope-based DNA vaccines against AD, consisting of multiple copies of self B-cell epitopes, supplemented by various foreign Th-cells epitopes form traditional vaccines or different pathogens, such as influenza virus epitopes. The use of such foreign Th-epitopes for immunizations of patients in the early stages of AD or patients of advanced age who have preexisting memory T-cell according to Th-epitopes would be safe and effective. Following this idea, were created AV-1955 and AV-1959 epitopes-based DNA vaccine against AD and were tested for mice, rabbits and rhesus macaques. Since it is known that DNA vaccines have relatively weak immunogenicity. Therefore, in these studies the DNA vaccine has been improved by including in its composition three copies short self immunodominant B-cell epitope of peptide Aβ42 (Aβ1-11) and 9/12 the nonself universal Th-cell epitopes – MultiTEP. However in clinical trials DNA vaccines are less effective in inducing potent immune responses due to the low delivery efficiency and expression of antigens. Therefore, in order to increase the efficiency of DNA transfection into cells for immunization was used TriGrid system electroporation, which contributes significant increase of gene expression in vivo from 100 to 1000 fold compared with needle injection of naked plasmid DNA.

      Item Type: Thesis (PhD)
      Additional Information: Ալցհեյմերի հիվանդության դեմ ԴՆԹ-պատվաստանյութերի ստեղծումը և իմունաբանական արդյունավետության փորձարկումը կենդանիների մոդելների վրա: Designing and testing immunological efficacy of DNA-vaccines for alzheimer's disease in an animals models.
      Uncontrolled Keywords: Հովակիմյան Արմինե Աշոտի, Hovakimyan Armine Ashot
      Subjects: Biology
      Divisions: UNSPECIFIED
      Depositing User: NLA Circ. Dpt.
      Date Deposited: 09 Sep 2016 13:57
      Last Modified: 13 Sep 2016 10:56
      URI: http://etd.asj-oa.am/id/eprint/3400

      Actions (login required)

      View Item