Հայաստանի ատենախոսությունների բաց մատչելիության պահոց = Open Access Repository of the Armenian Electronic Theses and Dissertations (Armenian ETD-OA) = Репозиторий диссертаций Армении открытого доступа

Մարդկային ակունքից նոր լակտոբակտերիաների անջատումը, ուսումնասիրությունը և գենետիկական նույնականացումը

Գրիգորյան, Գոհար Գագիկի (2015) Մարդկային ակունքից նոր լակտոբակտերիաների անջատումը, ուսումնասիրությունը և գենետիկական նույնականացումը. PhD thesis, ՀՀ ԳԱԱ «Հայկենսատեխնոլոգիա» ԳԱԿ ՊՈԱԿ.

[img] PDF (Abstract)
Available under License Creative Commons Attribution.

Download (1342Kb)

    Abstract

    Կաթնաթթվային բակտերիաները լայնորեն տարածված են մարդու աղեստամոքսային և միզասեռական (ուռոգենիտալ) համակարգերում: Նրանք արտազատում են հակամանրէային միացություններ, ինչպիսիք են կաթնաթթուն, ջրածնի պերօքսիդը և բակտերիացինները [Hughes V.L., et al., 1990., Klebanoff S.J., et al., 1991]: Կաթնաթթվային բակտերիաները որպես պրոբիոտիկներ լայնորեն կիրառվում են ժամանակակից բժշկության մեջ դիսբակտերիոզների բուժման ժամանակ: Առողջությանը նպաստող ֆունկցիոնալ սննդի և դեղագործական պատրաստուկների պրոբիոտիկ բաղադրամասերի ընտրության չափորոշիչները հետևյալն են` ա) պետք է անջատված լինեն մարդու օրգանիզմից, բ) պետք է գոյատևեն աղեստամոքսային և հեշտոցային էկոհամակարգերում, գ) պետք է կայուն լինեն լեղու հանդեպ, դ) պետք է կարողանան ամրանալ հեշտոցային և աղիքային էպիթելիալ հյուսվածքներին: Վերարտադրողական տարիքի կանանց մոտ կաթնաթթվային բակտերիաները հեշտոցային նորմալ միկրոֆլորայի մեծ մասն են կազմում` իրագործելով պաշտպանական ֆունկցիա սեռավարակների հանդեպ [Antonio M.A.D., et al., 1999, Cohen C.R., et al., 1995, Giorgi, A., et al., 1987]: Հեշտոցի ինֆեկցիոն - բորբոքային հիվանդությունները վերարտադրողական տարիքի կանանց մոտ զբաղեցնում են առաջին տեղը և դրանց թիվը շարունակում է մեծանալ` չնայած այդ խնդրի հետազոտությունների առաջընթացին: Այդ հիվանդությունները կապված են վերարտադրողական համակարգի օրգանների հետ, ուստի կարող են բերել լուրջ դեմոգրաֆիկ հետևանքների: Համարվում է, որ կնոջ մոտ բակտերիալ վագինոզի հիմնական նախապայման է հանդիսանում հեշտոցային կաթնաթթվային բակտերիաների քանակի կտրուկ նվազումը կամ բացակայությունը հակաբիոտիկների, որոնք ախտածին բակտերիաների հետ մեկտեղ ոչնչացնում են նաև օգտակար կաթնաթթվային բակտերիաները, կամ սթրեսային գործոնների ազդեցության հետևանքով [Cohen C.R., et al., 1995, Hawes S.E., et al., 1996, Falagas M.E., et al., 2006]: Բակտերիալ վագինոզների բուժման առավել ռացիոնալ մոտեցում է համալիր բուժումը, որն ուղղված է ախտածին հարուցիչների ոչնչացմանը, իմուն համակարգի խթանմանը, հեշտոցի գաղութացմանը ակտիվ պրոբիոտիկ լակտոբակտերիաներով [Hawes S.E., et al., 1996, Falagas M.E., et al., 2006]: Հեշտոցի գաղութացման համար առողջ կանանց հեշտոցային միկրոֆլորայից անջատված պրոբիոտիկ շտամները գերադասելի են, քան այլ աղբյուրներից, օրինակ յոգուրտներից անջատված կաթնաթթվային բակտերիաները, որոնց ադապտացիայի արդյունավետությունը հեշտոցային բիոտոպում անհամեմատ ավելի ցածր է [Mitchell C., et al., 2012, Bastani P., et al., 2012, Mastromarino P., et al., 2013]: Ключевые слова: Вагинальные пробиотики, молочнокислые бактерии, микробные взаимодействия, бактериальная адгезия, аутоагрегация, коагрегация. Видовое разнообразие вагинальных МКБ у женщин, живущих в различных географических регионах, сильно отличается в зависимости от климатических условий, диеты, образа жизни и т.д. По литературным данным, у женщин Европы и Америки вагинальная микрофлора в основном представлена бациллами, в Европе и Северной Америке доминирует L. crispatus, а в Азии Pediacoccus. 40 чистых культур МКБ, выделенных у 39 женщин репродуктивного возраста, живущих в Армении, были представлены как бациллами, так и кокками в соотношении 3 : 1. Идентификация изолированных штаммов показала, что бациллы принадлежат к L. plantarum (22.5%), L. delbrueckii (15%), L. acidophilus (12.5%), L. helveticus (5%), L. fermentum (2.5%), L. salivarius (2.5%), L. rhamnosus (2.5%), а кокки - к L. lactis (22.5%), L. cremoris (12.5%) и Str. thermophilus (2.5%) видам. Антимикробная активность МKБ в основном обусловлена синтезом молочной кислоты, перекиси водорода и бактериоцинов. Все культуры, изолированные нами, за день продуцируют 8.1-15.3 мг/мл молочной кислоты. Противомикробная активность культуральных жидкостей, нейтрализованных с помощью NaOH, а также потеря их активности после обработки протеазами (протеиназ К, пепсин и трипсин) свидельствуют о синтезе лактацинов у МКБ. Сохранение антимикробной активности у некоторых штаммов: L. acidophilus GH 201, L. plantarum GH 202 и L. delbruecki GH 205, обусловлено образованием ими перекиси водорода. Изучение адгезивных свойств изолированных штаммов в условиях in vitro показало высокую коагрегационную способность L. acidophilus GH 201, L. plantarum GH 202 и L. delbruecki GH 205 штаммов (соответственно 50.73%, 49.71% и 35.8%) с C. albicans - основным возбудителем вагинозов. Пробиотические бактерии путем коагрегации с патогенными микроорганизмами препятствуют их адгезии к эпителиальным клеткам, а также повышают эффективность антимикробного действия. Так, присутствующие в супернатанте L. plantarum GH 202 метаболиты, резко снижают адгезивные свойства С. albicans: с 46.6% до 12.64%. Особый интерес представляет тот факт, что изолированный нами L. lactis GH 204 также обладает высокой коагрегационной способностью с C. albicans, превосходящей известный штамм L. lactis АТСС 19435 примерно в 20 раз. 21 экосистемы. Высокая гидрофобность штаммов, входящих в состав консорциумов, обнаруживаемая с помощью MATS теста, может способствовать образованию биопленки и колонизации вагинального биотопа смешанными культурами. Key words: vaginal probiotics, lactic acid bacteria, microbial interactions, bacterial adhesion, autoaggregation, coaggregation. The species diversity of vaginal LAB of women living in different geographical regions significantly differs depending on the climatic conditions, diet, lifestyle, etc. According to the literature, in Europe and North America women’s vaginal microflora is mainly represented by bacilli, where L. crispatus dominates, but in Asia - Pediacoccus. 40 pure LAB cultures isolated from 39 women of reproductive age living in Armenia were represented by both bacilli and cocci in the ratio 3 : 1. The identification of the isolated strains showed that the bacilli belonged to L. plantarum (22.5%), L. delbrueckii (15%), L. acidophilus (12.5%), L. helveticus (5%), L. fermentum (2.5%), L. salivarius (2.5%), L. rhamnosus (2.5%), and cocci – to L. lactis (22.5%), L. cremoris (12.5%) and Str. thermophilus (2.5%) species. The antimicrobial activity of LAB is mainly caused by the production of lactic acid, hydrogen peroxide and bacteriocins. All isolated cultures produce 8.1-15.3 mg/ml lactic acid per day. The antimicrobial activity of culture fluids neutralized with NaOH, as well as the loss of their activity after treatment with proteases (proteinase K, trypsin, and pepsin) indicate the synthesis of lactacins in LAB. The preservation of the antimicrobial activity in some strains: L. acidophilus GH 201, L. plantarum GH 202 and L. delbruecki GH 205 is due to the formation of hydrogen peroxide. The study of adhesive properties of isolated strains in vitro conditions showed high coaggregation ability of L. acidophilus GH 201, L. plantarum GH 202 and L. delbruecki GH 205 (50.73%, 49.71% and 35.8% respectively) with C. albicans - the main causative agent of vaginoses. Probiotic bacteria inhibit pathogens adhesion to epithelial cells due to coaggregation with them, and also improve the efficiency of antimicrobial action. Thus, metabolites present in the supernatant of L. plantarum GH 202 drastically reduce the adhesive properties of C. albicans from 46.6% to 12.64%. The fact of special interest is that L. lactis GH 204 isolated by us has also a high coaggregation capacity with C. albicans, about 20 times surpassing the well-known strain L. lactis ATCC 19435.

    Item Type: Thesis (PhD)
    Additional Information: Выделение, изучение и генетическая идентификация новых лактобактерий из человеческого источника. Isolation, study and genetic identification of new lactobacteria of human origin.
    Uncontrolled Keywords: Григорян Гоар Гагиковна, Grigoryan Gohar Gagik
    Subjects: Biology
    Divisions: UNSPECIFIED
    Depositing User: NLA Circ. Dpt.
    Date Deposited: 05 Oct 2016 15:55
    Last Modified: 05 Oct 2016 15:55
    URI: http://etd.asj-oa.am/id/eprint/3571

    Actions (login required)

    View Item