Հայաստանի ատենախոսությունների բաց մատչելիության պահոց = Open Access Repository of the Armenian Electronic Theses and Dissertations (Armenian ETD-OA) = Репозиторий диссертаций Армении открытого доступа

Առնետի լյարդի արգինազի դարձելի ինակտիվացման առանձնահատկությունները ցածր pH-ի պայմաններում և ԷԴՏԱ-ի ազդեցությամբ

Սիմոնյան, Թամարա Նվերի (2014) Առնետի լյարդի արգինազի դարձելի ինակտիվացման առանձնահատկությունները ցածր pH-ի պայմաններում և ԷԴՏԱ-ի ազդեցությամբ. PhD thesis, ԵՊՀ.

[img] PDF (Abstract)
Available under License Creative Commons Attribution.

Download (912Kb)

    Abstract

    Վերջին տարիներին անհատական սպիտակուցների ուսումնասիրությունները բազմաթիվ հետազոտողների ուշադրության կենտրոնում են: Հայտնի է, որ նյութափոխանակության կարգավորման ընթացքում կարևոր դեր են խաղում իզոֆունկցիոնալ սպիտակուցները, հատկապես իզոֆերմենտները: ԵՊՀ կենսաքիմիայի ամբիոնում երկար տարիների ընթացքում ուսումնասիրվում են էվոլյուցիոն զարգացման տարբեր մակարդակներում գտնվող օրգանիզմների ազոտային փոխանակության ֆերմենտները, մասնավորապես, օրնիտինային ցիկլի ֆերմենտները: Այդ աշխատանքների շարքում ներկայումս մեծ հետաքրքրություն են ներկայացնում բնության մեջ լայնորեն տարածված տարբեր ծագում ունեցող ուրեոթելիկ և ոչ ուրեոթելիկ արգինազների ուսումնասիրությունները: Վաղ շրջանի հետազոտությունների մեծ մասի արդյունքները, որոնք հիմնված էին ուրեոթելիկ արգինազների մի շարք ֆիզիկաքիմիական և կինետիկ հատկությունների ուսումնասիրության վրա, վկայում էին այն մասին, որ այս արգինազները նույնական են: Սակայն այդ աշխատանքների տվյալների խորը վերլուծությունը և մեր կողմից որոշակի գործոնների ազդեցությամբ ֆերմենտի ակտիվության փոփոխությունները և ենթամիավորային կազմի ուսումնասիրությունները հանգեցրին այն մտքին, որ յուրաքանչյուր առանձին դեպքում լյարդի ուրեոթելիկ արգինազն օժտված է որոշակի առանձնահատկություններով, որոնք տարբերում են վերջինիս էվոլյուցիոն զարգացման տարբեր մակարդակներում գտնվող մի շարք օրգանիզմների արգինազներից: Այս հարցերը կենսաքիմիայի ամբիոնում բավականին մանրամասն ուսումնասիրվել են, մասնավորապես, երկկենցաղների մոտ Rana ridibunda գորտի օրինակով: Լյարդի ուրեոթելիկ արգինազի տեսակային տարբերությունները կարող են հսկայական լինել տարբեր դասերի մոտ, կարող են տարբերվել նաև ակտիվ կենտրոններն իրենց կառուցվածքով: Ակնհայտ է, որ արտաքին գործոնների փոփոխության ազդեցության արդյունքում, հնարավոր է կենսաքիմիական ադապտացիա, այսինքն վերմոլեկուլային մակարդակով ֆերմենտատիվ համակարգերի փոփոխություններ: Նշենք, որ այդ գործընթացների մեխանիզմների ուսումնասիրությունը կենսաքիմիայի կարևորագույն հարցերից է: Ключевые слова: изофермент, гипобарическая гипоксия, денатурация, ренатурация, флуоресценция , этилендиаминтетраацетат (ЭДТА) Одним из важных и интересных вопросов современной биохимии является проблема регуляции метаболизма в живых системах, что в конечном счете сводится к управлению действием биологических катализаторов – ферментов. В настоящее время большой интерес представляет изучение индивидуальных изофункциональных белков (изоферментов), участвующих в различных биохимических процессах. В представленной работе проведено исследование субъединичного строения уреотелической аргиназы печени крыс и выявление изменений активности фермента в ходе обратимой инактивации под влиянием низких pH и ЭДТА. Этот метод довольно широко распространен при изучении свойств олигомерных белков. В ходе экспериментов несколько усовершенствован метод обратимой инактивации, выявлены оптимальные условия инактивации фермента 2-мя способами и последующей реактивации (pH, молярность использованных буферов, наличие и концентрация ионов ряда двухвалентных катионов, влияние степени очистки фермента). Выявлены и идентифицированы образующиеся, при обратимой инактивации промежуточныe структуры. Инактивация при низких pH приводила к образованию субъединиц с молекулярной массой 32000 Да, под действием ЭДТА-39000 Да. Реактивация фермента приводила к образованию олигомера с м.м. 110000-125000 Да, что практически соответствовало м.м. тримерного нативного фермента. Примечательно, что ионы Mg2+ были более эффективны для процесса реактивации фермента, чем физиологический активатор Mn2+. Keywords: denaturation, ethyilenediaminetetraacetic acid (EDTA), fluorescence, hypobaric hypoxia, isoenzyme, renaturation One of the important and interesting issues of modern biochemistry is the problem of regulation of metabolism in living systems that ultimately occurs by biological catalisators- enzymes. Nowadays, the study of individual isofunctional proteins (isoenzymes) which are involved in various biochemical processes is in great importance. In the presented work is studied the subunit structure of rat liver ureotelic arginase and are detected changes in enzyme activity during the reversible inactivation by EDTA and at low pH. These methods are quite common in the process of studying the properties of oligomeric proteins. Mentioned methods revealed the optimal conditions for inactivation of the enzyme by different pathways and subsequent reactivation (pH, buffer molarity, the presence and concentration of some divalent cations and influence of the enzyme’s purification degree).

    Item Type: Thesis (PhD)
    Additional Information: Особенности обратимой инактивации аргиназы печени крыс при низких pH и действии ЭДТА. Peculiarities of reversible inactivation of rat liver arginase by influence of EDTA and at low pH conditions.
    Uncontrolled Keywords: Симонян Т.Н.,Simonyan T.N.
    Subjects: Chemistry
    Divisions: UNSPECIFIED
    Depositing User: NLA Circ. Dpt.
    Date Deposited: 02 Mar 2017 11:01
    Last Modified: 03 Mar 2017 10:06
    URI: http://etd.asj-oa.am/id/eprint/4226

    Actions (login required)

    View Item